PCR是一種敏感和有效的方法,用于在短時間內(nèi)將單拷貝的目標DNA序列擴增至數(shù)百萬拷貝。因此用于PCR反應(yīng)的
96孔PCR板必須避免存在污染物和抑制劑,同時又具有可保障PCR效果的高質(zhì)量。
為了避免可干擾DNA擴增的污染,PCR板應(yīng)不含核酸酶和DNA的污染。盡管如高壓和輻射等滅菌方法可去除細菌和DNA酶,但這些方法并不能去除灰塵和DNA殘留。殘留的灰塵客戶可能會抑制PCR,而片段化的DNA依然可作為模板從而產(chǎn)生非特異性的擴增。
因此,在生產(chǎn)96孔PCR板時,從制模到包裝都必須在具有顆粒數(shù)量限制的設(shè)施環(huán)境中進行。例如,100000級潔凈室允許在立方英尺空氣中不超過100,000個直徑≥0.5μm的顆粒。這些類型的設(shè)施符合國際標準化組織(如)規(guī)定的嚴格指導(dǎo)原則,以防止灰塵和生物污染。
為了確保質(zhì)量,生產(chǎn)商可能需要對PCR板材進行視覺或物理檢驗其完整性,以確保對于反應(yīng)成分保護。可以執(zhí)行物理測試來評估樣品孔的蒸發(fā),密封和電連續(xù)性以檢查泄漏。
對于生物測試,PCR板會進行某些DNA目標分子的qPCR擴增,以評估核酸酶和人類DNA的污染。生產(chǎn)商對于經(jīng)歷過這些嚴格檢驗的96孔PCR板可提供相應(yīng)的檢測報告書。